1.1 Уургийн инженерчлэлийн тухай ойлголт. Хөгжлийн түүх

Уургийн инженерчлэл нь ашигтай эсвэл үнэ цэнэтэй уураг боловсруулах чиглэлээр ажилладаг биотехнологийн салбар юм. Энэ нь уургийн нугалах, уургийг өөрчлөх, үүсгэх зарчмуудыг судлахад чиглэсэн харьцангуй шинэ салбар юм.

Уургийн инженерчлэлийн хоёр үндсэн стратеги байдаг: чиглэсэн уургийн өөрчлөлт ба чиглэсэн хувьсал. Эдгээр аргууд нь бие биенээ үгүйсгэдэггүй; Судлаачид ихэвчлэн хоёуланг нь ашигладаг. Ирээдүйд уургийн бүтэц, үйл ажиллагааны талаар илүү нарийвчилсан мэдлэг, түүнчлэн өндөр технологийн дэвшил нь уургийн инженерчлэлийн боломжийг ихээхэн өргөжүүлж чадна. Үүний үр дүнд, шинэ амин хүчлийг генетикийн кодонд оруулах боломжийг олгодог шинэ аргын ачаар байгалийн бус амин хүчлийг ч нэгтгэж болно.

Уургийн инженерчлэл нь уургийн физик, хими, генийн инженерчлэлийн уулзвараас үүссэн. Энэ нь тодорхой шинж чанартай өөрчлөгдсөн эсвэл эрлийз уургийн молекулуудыг бий болгох асуудлыг шийддэг. Ийм даалгаврыг хэрэгжүүлэх байгалийн арга бол өөрчлөгдсөн уургийг кодлодог генийн бүтцийг урьдчилан таамаглах, түүний синтез, клончлох, хүлээн авагч эсүүдэд илэрхийлэх явдал юм.

Уургийн хяналттай анхны өөрчлөлтийг 60-аад оны дундуур Кошланд, Бендер нар хийсэн. Протеазын идэвхтэй төв болох субтилизин дэх гидроксил бүлгийг сульфгидрил бүлгээр солихын тулд тэд химийн өөрчлөлтийн аргыг ашигласан. Гэсэн хэдий ч ийм тиолсубтилизин нь протеазын идэвхийг хадгалдаггүй.

Химийн хувьд уураг нь нэг төрлийн молекул бөгөөд энэ нь полиамин хүчлийн хэлхээ эсвэл полимер юм. Энэ нь 20 төрлийн амин хүчлийн дарааллаас бүрдэнэ. Уургийн бүтцийг олж мэдсэний дараа хүмүүс дараахь асуултыг асуув: амин хүчлийн цоо шинэ дарааллыг зохиож, тэдгээр нь энгийн уургуудаас хамаагүй илүү хүмүүст шаардлагатай функцийг гүйцэтгэх боломжтой юу? Уургийн инженерчлэл гэдэг нэр нь энэ санаанд тохирсон байв.

Хүмүүс ийм инженерчлэлийн талаар 20-р зууны 50-аад оны үед бодож эхэлсэн. Энэ нь уургийн амин хүчлийн эхний дарааллыг тайлсаны дараа шууд болсон. Дэлхийн олон лабораторид байгалийн жамыг хуулбарлах, полиамин хүчлийн дурын дарааллаар химийн нийлэгжүүлэх оролдлого хийсэн.

Үүнд химич Б.Мериффилд хамгийн их амжилтанд хүрсэн. Энэ америк хүн полиамин хүчлийн гинжийг нэгтгэх маш үр дүнтэй аргыг боловсруулж чадсан. Үүнийхээ төлөө Меррифелд 1984 онд химийн салбарт Нобелийн шагнал хүртжээ.

Зураг 1. Уургийн инженерчлэл хэрхэн ажилладаг тухай схем.

Америкчууд богино пептид, түүний дотор гормонуудыг нэгтгэж эхлэв. Үүний зэрэгцээ тэрээр хиймэл уураг үйлдвэрлэх зорилготой автомат - "химийн робот" бүтээжээ. Робот шинжлэх ухааны хүрээнийхэнд шуугиан тарьсан. Гэвч төд удалгүй түүний бүтээгдэхүүн байгалийн үйлдвэрлэдэг зүйлтэй өрсөлдөх чадваргүй болох нь тодорхой болов.

Робот амин хүчлийн дарааллыг үнэн зөв гаргаж чадахгүй, өөрөөр хэлбэл алдаа гаргасан. Тэрээр нэг гинжийг нэг дараалалтай, нөгөөг нь бага зэрэг өөрчилсөн нэг гинжийг нэгтгэсэн. Эсэд нэг уургийн бүх молекулууд бие биетэйгээ маш төстэй байдаг, өөрөөр хэлбэл тэдгээрийн дараалал нь туйлын ижил байдаг.

Өөр нэг асуудал гарсан. Роботын зөв нийлэгжүүлсэн молекулууд хүртэл ферментийн үйл ажиллагаанд шаардлагатай орон зайн хэлбэрийг авч чадаагүй. Тиймээс байгалийг органик химийн ердийн аргаар орлуулах оролдлого нь маш даруухан амжилтанд хүргэсэн.

Эрдэмтэд уургийн шаардлагатай өөрчлөлтийг хайж, зөвхөн байгалиас суралцах боломжтой байв. Энд гол зүйл бол байгальд уургийн амин хүчлийн дарааллыг өөрчлөхөд хүргэдэг мутаци байнга байдаг. Хэрэв та тодорхой субстратыг илүү үр дүнтэй боловсруулдаг шаардлагатай шинж чанартай мутантуудыг сонговол ийм мутантаас өөрчлөгдсөн ферментийг тусгаарлаж, үүний ачаар эс шинэ шинж чанарыг олж авдаг. Гэхдээ энэ үйл явц маш урт хугацаа шаарддаг.

Генийн инженерчлэл гарч ирэхэд бүх зүйл өөрчлөгдсөн. Түүний ачаар тэд ямар ч нуклеотидын дараалал бүхий хиймэл генийг бүтээж эхлэв. Эдгээр генийг бэлтгэсэн вектор молекулуудад оруулж, ДНХ-ийг бактери эсвэл мөөгөнцөрт нэвтрүүлсэн. Тэнд хиймэл генээс РНХ-ийн хуулбарыг авсан. Үүний үр дүнд шаардлагатай уураг гаргаж авсан. Түүний синтезийн алдааг хассан. Хамгийн гол нь зөв ДНХ-ийн дарааллыг сонгох явдал байсан бөгөөд дараа нь эсийн ферментийн систем өөрөө үүргээ төгс гүйцэтгэсэн. Тиймээс бид генийн инженерчлэл нь уургийн инженерчлэлийн замыг хамгийн радикал хэлбэрээр нээж өгсөн гэж дүгнэж болно.

Уургийн инженерчлэл

Зорилтот уургийн өөрчлөлт. Зорилтот уургийн өөрчлөлтөд эрдэмтэн уургийн бүтэц, үйл ажиллагааны талаархи нарийвчилсан мэдлэгийг ашиглан хүссэн өөрчлөлтийг хийдэг. Ерөнхийдөө энэ арга нь давуу талтай...

Уургийн инженерчлэл

Уургийн инженерчлэлийн технологийг (ихэвчлэн рекомбинант ДНХ-ийн аргатай хослуулан) ашиглаж байгаа уургийн (фермент, эсрэгбие, эсийн рецептор) шинж чанарыг сайжруулж, байгальд байхгүй шинэ уургийг бий болгодог...

Уургийн инженерчлэл

1. Бактериофагийн Т4 лизоцимийн хэд хэдэн амин хүчлийн үлдэгдлийг цистеинээр сольсноор олон тооны дисульфидын холбоо бүхий ферментийг гаргаж авсан ба үүний ачаар энэ фермент илүү өндөр температурт үйл ажиллагаагаа хадгалсан. 2...

Төрөл ба төрөл зүйл

Аристотель ижил төстэй амьтдыг тодорхойлохдоо "төрөл зүйл" гэсэн нэр томъёог ашигласан. Д.Рэй (1686), тэр дундаа К.Линнейсийн (1751-- 1762) бүтээлүүд гарч ирсний дараа төрөл зүйлийн тухай ойлголт нь биологийн шинжлэх ухаанд үндсэн...

Насанд хүрэгчдийн мэдрэлийн үйл ажиллагаа өндөр байдаг

Тархины үйл ажиллагаа олон жилийн турш хүн төрөлхтний хувьд тайлагдаагүй нууц хэвээр байсаар ирсэн. Зөвхөн санваартнууд төдийгүй идеализм гэж үздэг эрдэмтэд бие махбод дахь бүх сэтгэцийн үйл явцыг нууцлаг сүнстэй холбодог ...

Бодит параметрүүдийг оновчтой болгох асуудалд генетикийн алгоритмууд

Стандарт генетикийн алгоритм гэж нэрлэгддэг зүйлийг анх Де Жонгийн бүтээлд нарийвчлан тайлбарлаж, судалж үзсэн ...

Генетикийн инженерчлэл

Генетикийн инженерчлэл нь биохими, молекул генетикийн янз бүрийн салбар дахь олон судлаачдын ажлын үр дүнд бий болсон. Олон жилийн турш уураг нь макромолекулын үндсэн анги гэж тооцогддог. Таамаглал хүртэл байсан ...

Өвчин эмгэгийг эмчлэх, эм бүтээхэд генетикийн инженерчлэлийг ашиглах

Биохими, молекул генетикийн янз бүрийн салбарын олон судлаачдын ажлын үр дүнд генийн инженерчлэл үүссэн...

Генетикийн түүх

Чарльз Дарвины сургаалийг өргөн дэлгэр дэлгэрүүлсний дараа онолын сул талыг онцолсон анхны шүүмжлэгчдийн нэг бол Шотландын судлаач Ф.Женкинс юм. 1867 онд тэрээр Дарвины онолд ... гэсэн асуултын талаар тодорхой зүйл байгаагүй гэж тэмдэглэжээ.

Орчин үеийн технологи, эрчим хүчийг хөгжүүлэх үзэл баримтлал

Биеийн хөдөлмөрийг хөнгөвчлөхийн тулд эрт дээр үеэс хүний ​​механик чадварыг сайжруулдаг янз бүрийн төхөөрөмж, механизм, машинуудыг зохион бүтээжээ. Гэтэл хэдхэн механизм л хүнийг ажил хийхэд нь тусалсан...

Клончлолын онцлог

Тахианы үүлдэр, тэдгээрийн орчин үеийн тархалт

Дэлхийн ихэнх оронд шувууны аж ахуй нь хөдөө аж ахуйн үйлдвэрлэлийн бусад салбаруудын дунд тэргүүлэх байр суурийг эзэлдэг бөгөөд хүн амыг өндөр үнэ цэнэтэй хүнсний бүтээгдэхүүнээр (өндөг, мах, амттай элэг) хангадаг ...

Вернадскийн ноосферийн онолын үүднээс хүн төрөлхтний оршин тогтнох асуудал

Байгалийн юмс үзэгдлийн ажиглалтад үндэслэн амьд биетүүд гадаад орчинтойгоо харилцан үйлчилж, түүний өөрчлөлтөд нөлөөлдөг гэсэн ойлголт эртнээс бий болсон...

Цитогенетик нь шинжлэх ухаан юм

Цитогенетик бол удамшлын материаллаг үндэслэлийн шинжлэх ухаан юм. Тэрээр эсийн генетик бүтцийн бүтэц, нөхөн үржихүй, рекомбинаци, өөрчлөлт, үйл ажиллагааны онцлог, митоз дахь тархалтыг судалдаг...

Организмын бүлгүүдийн хувьсал

Хувьслын онол бол амьд байгалийн түүхэн хөгжлийн ерөнхий зүй тогтол, хөдөлгөгч хүчний тухай сургаал юм. Энэхүү сургаалын зорилго: Органик ертөнцийн хөгжлийн зүй тогтлыг тодорхойлох, энэ үйл явцыг дараа нь удирдах...

480 рубль. | 150 грн | $7.5 ", MUSEOFF, FGCOLOR, "#FFFFCC", BGCOLOR, "#393939");" onMouseOut="return nd();"> Диссертаци - 480 RUR, хүргэлт 10 минут, цагийн турш, долоо хоногийн долоон өдөр, амралтын өдрүүдэд

Ефимов Григорий Александрович. TNF-ийн эсрэг рекомбинант эсрэгбие дээр суурилсан генетикийн инженерчлэлийн шинэ уургууд: диссертаци... Биологийн шинжлэх ухааны нэр дэвшигч: 01/03/03 / Ефимов Григорий Александрович; 122 с.

Оршил

Уран зохиолын тойм 9

1. tnf 9-ийн нээлтийн түүх

2. TNF 10 супер гэр бүл

3. Системийн бүтэц tnfnfr 12

4. tnf 15 функцууд

5. Ревматоид артрит болон бусад аутоиммун өвчний эмгэг жам дахь TNF-ийн үүрэг 16

6. Эмчилгээний хориглогч tnf 18

7. Антинф эмчилгээний гаж нөлөө ба хязгаарлалт 23

8. tnf блоклох шинэ хандлага, хэтийн төлөв 25

Материал ба судалгааны арга 29

1. Хүний tnf-ийн шинэ тэмээний нэг домэйн эсрэгбиеийн үйлдвэрлэл ба шинж чанар 29

Нэг домайн эсрэгбие Vhh41-ийн илэрхийлэл ба цэвэршүүлэх 29

ELISA 30-аар Vhh41 эсрэгбиемийг хүний ​​TNF-тэй холбох үнэлгээ

Гадаргуугийн плазмын резонансын аргыг ашиглан Vhh41 ба хүний ​​TNF хоорондын харилцан үйлчлэлийн судалгаа 31

Vhh41 нь хүний ​​TNF 31-ийг блоклох чадварыг судлах

2. TNF флюресцент мэдрэгчийн эрлийз уургийн дизайн, бэлтгэл, шинж чанар 32

TNF мэдрэгчийг кодлодог генийг бүтээх. 32

TNF флюресцент мэдрэгчийг илэрхийлэх, цэвэршүүлэх. 33

Vhh41-K-ийн рекомбинант TNF-тэй харилцан үйлчлэлийн дүн шинжилгээ. 34

Vhh41-KTNFin флюресцент мэдрэгчийн биологийн шинж чанарыг судлах in vitro болон in vivo. Z5

Флюресцент мэдрэгчийн TNF-ийг in vivo-д холбох чадварыг судлах 36

Олж авсан флюресцент мэдрэгчийг ашиглан TNF илэрхийлэлийг судсаар судлах...39

3. Нэг гинжин ANTINF эсрэгбие бэлтгэх ба шинж чанар 40

Хулганы моноклональ эсрэгбие F10 40-ийн судалгаа

Нэг гинжин эсрэгбиеийн бүтэц, илэрхийлэл ahT-4 41

Нэг гинжин эсрэгбиеийн биологийн идэвхийг хэмжих ahT-4 42

4. Химерик антинф эсрэгбие бэлтгэх ба шинж чанар 43

5. А9 ба МА9 43 хоёр өвөрмөц эсрэгбиеийн бүтэц, үйлдвэрлэл, шинж чанар

А9 ба tA9 эсрэгбиеийн бүтэц, илэрхийлэл, цэвэршүүлэх 43 Аргын тусламжтайгаар A9 ба tA9 эсрэгбие нь хүний ​​рекомбинант TNF-тэй харилцан үйлчлэх.

гадаргуугийн плазмын резонанс 44

Цитотоксик тест 45

Цитофлюориметр 45

Хоёр өвөрмөц эсрэгбие А9 хүний ​​TNF-ийг хадгалах чадварыг үнэлэх

макрофагуудын гадаргуу 45

6. Макрофаг TNF-ийн системчилсэн болон сонгомол блоклох үр нөлөөний харьцуулсан үнэлгээ 46

JIIJC/D-галактозаминыг хэрэглэснээр өдөөгдсөн элэгний цочмог хордлогын загвар 46

Үр дүн ба хэлэлцүүлэг 48

1. Хүний TNF-тэй тусгайлан холбогддог боловч түүний биологийн идэвхийг блоклодоггүй шинэ рекомбинант нэг домайн эсрэгбиеийн үйлдвэрлэл ба шинж чанар 50

Рекомбинант нэг домэйн эсрэгбиемийг кодлох генетикийн бүтцийг бий болгох

Рекомбинант нэг домайн эсрэгбие Vhh41 52-ийн илэрхийлэл ба цэвэршүүлэх

Нэг домайн эсрэгбие Vhh41-ийн хүний ​​TNF 53-тай харилцан үйлчлэлийн дүн шинжилгээ.

Vhh41 эсрэгбие нь хүний ​​TNF-ийн биологийн идэвхийг хаах чадварын шинжилгээ.54

2. Нэг домайн рекомбинант эсрэгбие болон улаан флюресцент уураг дээр суурилсан tnf-ийн илэрхийлэлийг судсаар судлахад зориулсан TNF молекул мэдрэгчийг зохион бүтээх, үйлдвэрлэх, шинж чанар 56

TNF флюресцент мэдрэгч Vhh41-Ku-г кодлох генетикийн бүтцийг бэлтгэх.

нэгдэх уургийг хянах 56

TNF флюресцент мэдрэгч Vhh41-K-ийн илэрхийлэл ба цэвэршүүлэх. 57

TNF флюресцент мэдрэгч Vhh41-K болон рекомбинант хулгана TNF-ийн харилцан үйлчлэлийн дүн шинжилгээ

болон хүн 58

Флюресцент мэдрэгч TNF Vhh41-Kin-ийн биологийн шинж чанарыг судлах in vitro болон in vivo. 61

Флюресцент мэдрэгчийн TNF-ийг in vivo 66-д холбох чадварыг судлах

Олж авсан флюресцент мэдрэгчийг ашиглан TNF илэрхийлэлийг судсаар судлах... 69

3. TNF 72-ийн биологийн идэвхийг блоклодог рекомбинант нэг гинжин эсрэгбиеийг бэлтгэх, тодорхойлох

Хулганы моноклональ эсрэгбиеийн үйл ажиллагааг хэмжих F10 72

Уушигны хувьсах хэлтэрхийнүүд дээр үндэслэсэн нэг гинжин эсрэгбие бүтээх

хулганы моноклон эсрэгбиеийн хүнд гинж F 10 74

Нэг гинжин эсрэгбиеийн үйл ажиллагааг хэмжих ahT-4 75

4. Хүний TNF-ийн эсрэг химерик эсрэгбиемийг боловсруулах, шинжлэх

Химерик эсрэгбие 13239 ба инфликсимабын харилцан үйлчлэлийн кинетикийн харьцуулалт

Хүний рекомбинант TNF 77 Химерик эсрэгбие 13239-ийн саармагжуулах идэвхийг үйл ажиллагаатай харьцуулах

infliksimab in vitro 79

Химерик эсрэгбие 13239 80-ийн in vivo идэвхжилийн шинжилгээ

5. Моноцит-макрофаг 82 цувралын эсүүдээс үүссэн сонгомол tnf хориглогчийг зохион бүтээх, үйлдвэрлэх, шинж чанар.

Бис өвөрмөц эсрэгбиемүүдийг молекул клончлох, илэрхийлэх, цэвэршүүлэх 82

Хүний рекомбинант TNF 86-тай A9 ба tA9 эсрэгбиемүүдийн харилцан үйлчлэл

A9 ба tA9 87 эсрэгбиемүүдээр TNF-аас хамааралтай эсийн хоруу чанарыг in vitro-д хориглох

Макрофагтай харилцан үйлчлэлцэх замаар A9 ба tA9 эсрэгбиемүүдийг макрофагуудын гадаргуутай холбох шинжилгээ

гадаргуугийн молекул F4/80 89

Хүний эндогенээр үүсгэгдсэн TNF-ийг макрофагуудын гадаргуу дээр хадгалах

хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 93

6. In vivo 96 дахь моноцит-макрофагын удамшлын эсүүдээс үүссэн tnf-ийн физиологийн ач холбогдолтой сонгомол блоклох.

Цочмог хэлбэрийн загварт моноцит-макрофагын удамшлын эсүүдээр үүсгэгдсэн TNF-ийг зорилтот блоклох үр нөлөөг харьцуулсан үнэлгээ.

элэгний хоруу чанар 96

Дүгнэлт 99

Ашигласан материал 100

Ревматоид артрит болон бусад аутоиммун өвчний эмгэг жам дахь TNF-ийн үүрэг

Цитокины эсрэг эмчилгээний анхны туршлагыг 1985 онд туулайн поликлональ анти-NF ийлдэсийг хулганад өгөх үед хийсэн бөгөөд энэ нь LPS-ийн нөлөөгөөр үхлийн элэгний хордлого үүсэхээс сэргийлсэн юм. Сармагчинд ижил төстэй үр дүн гарсан: хүний ​​TNF-ийн эсрэг хулганы моноклональ эсрэгбиемээр эмчилсэн бабуунууд E. coli-ийн үхлийн тунг судсаар тарихад амьд үлджээ [104].

Анхны эмчилгээний TNF хориглогчийг хүний ​​TNF-ээр дархлаажуулсан хулганаас гаргаж авсан өндөр хамааралтай хулганы моноклональ эсрэгбие А2 дээр үндэслэн бүтээсэн. Бусад төрлийн эсрэгбиемүүд нь амин хүчлийн дараалалд ихээхэн ялгаатай байдаг тул хүний ​​биед удаан хугацаагаар хэрэглэхэд тохиромжгүй байдаг. Тиймээс генийн инженерчлэлийг ашиглан хүнд ба хөнгөн гинжний хулганы тогтмол домэйныг хүнийхээр сольсон. Антигенийг холбодог хувьсах бүсүүд өөрчлөгдөөгүй хэвээр байна. Ийм эсрэгбиемүүдийг химерик гэж нэрлэдэг. Үүний дараа TNF-ийн эсрэг анхны эмчилгээний эсрэгбие нь олон улсын өмчийн бус нэр болох инфликсимабыг хүлээн авсан.

АнтиNF эмчилгээний хамгийн тодорхой чиглэлүүдийн нэг бол сепсис эмчлэх явдал юм. Гэсэн хэдий ч эмнэлзүйн судалгаанууд мэдэгдэхүйц үр дүнд хүрээгүй бөгөөд энэ нь сепсисын эмнэлзүйн зураг үүсэх үед эргэлт буцалтгүй дохионы каскад аль хэдийн эхэлсэнтэй холбоотой бололтой.

Энэ үед ревматоид артрит үүсэхэд TNF-ийн оролцоог харуулсан олон баримтууд аль хэдийн хуримтлагдсан байсан тул энэ өвчнийг NF-ийн эсрэг эмчилгээний дараагийн боломжит зорилт болгон сонгосон. Ревматоид артрит дахь инфликсимабын туршилтын судалгаа нь нааштай үр дүнг харуулсан бөгөөд дараагийн санамсаргүй, давхар сохор судалгаа нь аутоиммун өвчний эмчилгээнд NF-ийн эсрэг эмчилгээний үр нөлөөг баталсан. Гэсэн хэдий ч давтан тарилга хийсний дараа зарим өвчтөнд хувьсах домэйнд хулганы амин хүчлийн дараалалд хамаарах эсрэгбие үүссэн нь эмчилгээний үр нөлөөг бууруулдаг.

Давхар сохор, санамсаргүй байдлаар хийсэн судалгаагаар инфликсимаб нь RA-ийн моно эмчилгээнд хэрэглэдэг цитостатик эм болох бага тунгаар метотрексаттай синергетик нөлөөтэй болохыг харуулсан. Эдгээр хоёр эмийг хослуулан хэрэглэхэд илүү үр дүнтэй бөгөөд инфликсимабын дархлааг бууруулдаг. Дараагийн II/III үе шатны эмнэлзүйн туршилтууд нь RA-ийн эмчилгээнд инфликсимаб хэрэглэхийг зөвшөөрсөн.

Инфликсимабын үйл ажиллагааны механизм нь уусдаг TNF-ийг системийн эргэлтэнд болон орон нутгийн хэт ихэссэн газруудад (RA-ийн синовиал хөндий) холбосонтой холбоотой юм. Нэмж дурдахад, инфликсимаб нь TNF-ийн трансмембран хэлбэрт холбогдож, эсрэгбиеээс хамааралтай цитотоксик механизмаар дамжуулан гадаргуу дээр нь зөөвөрлөж буй эсүүдийн задралыг үүсгэдэг.

AntiNF эмчилгээ нь эмгэгийн дохиоллын үе шатыг эвдэж, үрэвслийн хариу урвал буурахад хүргэдэг боловч үүнээс гадна энэ нь зохицуулалтгүй дархлааны системийг тэнцвэржүүлж чаддаг. TNF дарангуйлагчийг нэвтрүүлснээр Т-эффектор ба Т-зохицуулагч эсийн тэнцвэрт байдал өөрчлөгддөг.

AntiNF эмчилгээ нь этиотроп эмчилгээ биш бөгөөд онолын хувьд өвчтөний амьдралын туршид ашиглагдах ёстой боловч зарим тохиолдолд NF-ийн эсрэг эмчилгээг зогсоосон ч гэсэн тогтвортой арилах боломжтой байдаг.

TNF хориглогч нь бусад аутоиммун болон үрэвсэлт өвчнийг эмчлэхэд үр дүнтэй болохыг харуулсан: TNF нь Кроны өвчний эмгэг жаманд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг - гэдэсний үрэвсэлтэй хэсэгт хэт их хэмжээгээр илэрдэг. Стандарт эмчилгээнд тэсвэртэй Crohn-ийн өвчнийг инфликсимабаар эмчлэх анхны амжилтыг хожим санамсаргүй байдлаар эмнэлзүйн туршилтаар баталж, улмаар инфликсимабыг энэ өвчнийг эмчлэхийг зөвшөөрсөн.

Анкилозын спондилит (анкилозын спондилит) -ийн эмгэг жам нь үндсэндээ үе мөчний өвчинд нөлөөлдөг өөр нэг архаг системийн аутоиммун өвчин нь TNF-ийн хэт их илэрхийлэлтэй холбоотой юм. Инфликсимабын эмнэлзүйн туршилтууд энэ өвчний эсрэг амжилттай болсон. Үүнээс гадна antiNF эмчилгээ нь psoriasis болон psoriatic arthritis эмчилгээнд өндөр үр дүнтэй болохыг харуулсан.

Өнөөдрийг хүртэл инфликсимаб болон бусад TNF хориглогчийг дараах аутоиммун өвчний эмчилгээний бодис болгон баталсан: ревматоид артрит, насанд хүрээгүй идиопатик артрит, анкилозын спондилит, Кроны өвчин, шархлаат колит, псориаз, псориаз артрит. Үүнээс гадна TNF-ийн антагонистууд нь саркоидоз, Вегенерийн грануломатоз, Бехчетийн өвчин болон бусад архаг өвчний эмчилгээнд эерэг үр дүнг харуулсан.

TNF нь олон склерозын эмгэг жамд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг болохыг лабораторийн амьтдад хийсэн туршилтаар нотолсон. TNF-ийн хэрэглээ нь харханд туршилтын аутоиммун энцефаломиелитийн шинж тэмдгийг нэмэгдүүлж, NF эсрэгбиеийн эсрэгбиемүүдийг хэрэглэснээр энэ өвчний хөгжилд саад болж байна.

Гэсэн хэдий ч олон склерозын эмчилгээнд инфликсимаб ба өөр нэг TNF хориглогч ленерцепт (уусдаг TNFR1) эмнэлзүйн туршилтууд нь эмнэлзүйн чухал хариу үйлдэл үзүүлээгүй. Түүнээс гадна зарим өвчтөнд

Загвар аутоиммун өвчин, эмгэг жам нь олон склерозын эмгэг жамтай төстэй. Өвчний эмнэлзүйн шинж тэмдгүүд нэмэгдэж, тархи нугасны шингэн дэх эсийн чанар, иммуноглобулины түвшин нэмэгдэж, соронзон резонансын дүрслэлд гэмтэл гарсан.

Инфликсимабын амжилт нь TNFR-ээр дамжуулан дохионы дамжуулалтыг хаах чадвартай шинэ молекулуудыг хөгжүүлэхэд түлхэц өгсөн. Нэмж дурдахад инфликсимабын хүнд ба хөнгөн гинжний хувьсах хүрээн дэх хулганын дараалал нь зарим өвчтөнд хоёрдогч эсрэгбие үүсгэдэг бөгөөд энэ нь инфликсимабын үр нөлөөг хааж, өвчтөнүүдийг эмчилгээнд тэсвэртэй болгодог. Энэхүү хязгаарлалтыг даван туулахын тулд хүний ​​амин хүчлийн бүрэн дараалал бүхий дарангуйлагчийг бий болгох арга замыг сонгосон.

Өнөөдрийг хүртэл инфликсимабаас гадна дөрвөн TNF антагонистыг эмнэлзүйн хэрэглээнд зөвшөөрсөн (Зураг 2-ыг үз):

Этанерцепт нь уусдаг TNFR2-ээс бүтээгдсэн рекомбинант TNF дарангуйлагч юм. Түүний хөгжил нь хүний ​​​​биед хоёр дахь TNF рецепторын уусдаг хэлбэр байдаг гэсэн мэдээлэлд үндэслэсэн. Металопротеазаар "гуужуулсан" TNFR2 нь TNF-ийн үйл ажиллагааг зохицуулах нэмэлт холбоос юм. Этанерцепт нь иммуноглобулины IgG1-ийн Fc хэсэгтэй генетикийн хувьд ууссан TNFR2-ийн эсийн гаднах хэсгийн димер юм. Эсрэгбиеийн тогтмол бүстэй холбогдох нь FcRn рецептороор уургийн дахин боловсруулалт хийснээс болж системийн эргэлтэнд эмийн хагас задралын хугацааг ихээхэн нэмэгдүүлдэг. Уургийн саармагжуулах идэвхийг in vitro болон in vivo туршилтаар харуулсан бөгөөд дараа нь ревматоид артриттай өвчтөнүүдэд хийсэн эмнэлзүйн туршилтаар батлагдсан.

Гэсэн хэдий ч гэдэсний үрэвсэлт өвчнийг эмчлэхэд этанерцепт нь инфликсимабаас ялгаатай нь эмчилгээний үр нөлөөг харуулаагүй байна. Өөр нэг TNF рецептор болох TNFR1 (p55) -аас гаргаж авсан туршилтын TNF хориглогч онерцепт нь санамсаргүй, плацебо хяналттай, давхар сохор судалгаагаар туршилтын эмнэлзүйн судалгааг дэмжсэн ч Кроны өвчний эмчилгээнд үр нөлөө үзүүлээгүй. Crohn-ийн өвчтэй өвчтөнүүдийн ламина проприа дахь Т лимфоцитуудыг судалсан in vitro судалгаагаар инфликсимаб ба этанерцепт хоёулаа TNF-ийг блоклодог бол зөвхөн инфликсимаб нь гэмтлийн Т эсүүдтэй холбогдож, апоптозыг өдөөдөг болохыг харуулсан. Энэ нь гэдэсний үрэвсэлт өвчний эсрэгбием дээр суурилсан рецептор хориглогч ба рекомбинант рецепторын үр нөлөөний ялгааг тайлбарлаж болно.

Гадаргуугийн плазмын резонансын тусламжтайгаар Vhh41 ба хүний ​​TNF хоорондын харилцан үйлчлэлийн судалгаа

Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9-ийг кодлодог генетикийн бүтцийг HSH-ээр нэг хэлхээтэй эсрэгбиеийн ahT-4 генийн дээр тайлбарласантай төстэй 4 праймертай урвалд оруулав. Үүний үр дүнд үүссэн дараалал нь: нэг домайн эсрэг NF эсрэгбиеийн ген, дараа нь холбогч төрлийг кодлодог дараалал (Gly4Ser)3, нэг гинжин анти-P4/80 эсрэгбиеийн ген (С. Гордон, М. Стейси нар сайнаар өгсөн) . Нкол ба Кхол хязгаарлах ферментийг таних газруудыг урагш болон урвуу праймеруудын дараалалд тус тус оруулсан болно. ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг хязгаарлаж, pET-28b (Novagen) илэрхийллийн вектор болгон хуваасны дараа ижил унших хүрээн дэх 3-р төгсгөлд полигексидин тэмдэглэгээг кодлох дараалал олдсон. Хяналтын эсрэгбие wA9-ийг авахын тулд CDR дарааллын оронд глицин-сериний оруулга агуулсан мутант анти-G4/80 scFv генийг de-novo (Генеарт, Герман) нийлэгжүүлж, төрөлхийн анти-F4/80 генийн оронд клонжуулсан (Зураг 1). 31B).

Rosetta2(DE3)pLysS омгийн (Novagen) E. coli эсийг хувиргахад A9 ба mA9 кодчилол бүхий оруулга агуулсан илэрхийллийн векторуудыг ашигласан. Хамгийн сайн үйлдвэрлэх клонуудыг никель-коньюгат пероксидаз ашиглан колонийн дархлаажуулалтаар сонгосон (Пирс, 15165). Бактерийн өсгөвөрийг 50 cg/ml карбенициллин (Sigma-C1389) ба 50 cg/ml хлорамфеникол (Sigma-C1863) агуулсан LB орчинд ургуулж, логарифмын үе шат хүртэл ургуулж, дараа нь 0.2 мМ IPTG-ээр экспрессийг үүсгэв. 4 цагийн дараа өсгөвөрийг 3200 г-т 30 минутын турш центрифуг хийнэ. Үрлэнг хөлдөөж, дараа нь лизисын буферт (50 мМ TrisHCl, 300 MMNaCl, 5% глицерин, 0.5% Triton X-100 угаалгын нунтаг, 10,000 U/мл лизоцим, 10 мМ Р-меркаптометийг задлах бодис) дахин түдгэлзүүлэв. Лизатуудыг 17,000 г-т 40 минутын турш центрифуг хийж, дээд давхаргыг цуглуулж, 0.22 см-ийн нүхний диаметртэй шүүлтүүрээр шүүсэн. Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 болон tA9 нь Ni-nitriloacetic хүчил (Invitrogen R90115) -тай холбосон агароз агуулсан хроматографийн баганад цэвэршүүлсэн супернатантуудаас цэвэршүүлсэн. Ойролцоох хроматографийг үйлдвэрлэгчийн протоколын дагуу хийсэн. Үүссэн элюатыг төвлөрүүлж, фосфат буфержүүлсэн давсны уусмалд диализ хийж, дараа нь 0.22 μм шүүлтүүрээр шүүсэн. Уусмал дахь уургийн концентрацийг үйлдвэрлэгчийн протоколын дагуу 2,2-бицинхонины хүчилтэй (PIERCE 23225 иж бүрдэл) урвалаар хэмжсэн. Үүссэн бэлдмэлийн нэгэн төрлийн байдлыг натрийн додецил сульфаттай 15% полиакриламидын гель дэх электрофорезын аргаар шалгаж, дараа нь Coomassie будгаар будсан.

Гадаргуугийн плазмоны резонансын тусламжтайгаар A9 ба tA9 эсрэгбиемүүдийн рекомбинант хүний ​​TNF-тэй харилцан үйлчлэл.

A9 ба mA9 эсрэгбиемүүдийн хүний ​​рекомбинант TNF-тэй харилцан үйлчлэлийн хамаарал ба кинетикийн харьцуулалтыг ProteOn XPR36 төхөөрөмж (Bio-Rad) дээр хийсэн. Бүх харилцан үйлчлэлийн хэмжилтийн үед 7.4 рН-тэй фосфат буфержүүлсэн давсны уусмалыг хэрэглэсэн бөгөөд үүнд угаалгын нунтаг Tween 20-ийг 0.005% -ийн концентрацид нэмсэн, чипний гадаргуугийн температур 25 C. Хүний рекомбинант TNF-ийг E-ээр илэрхийлэв. coli-г өмнө тайлбарласан аргын дагуу . 50 нМ концентрацитай A9 ба tA9 эсрэгбие нь өөрчлөгдсөн алгинатын полимер гадаргуутай биочипын гадаргуу дээрх амин бүлгээр дамжин хөдөлгөөнгүй болсон (Bio-Rad 176-5011). Дараа нь аналитикийг (хүний ​​TNF) 2 дахин буурсан концентрацитай (50-3 нМ) таван зэрэгцээ сувагт хэрэглэсэн. Эсрэгбие агуулаагүй буферийг хэвийн болгохын тулд зургаа дахь сувагт нэвтрүүлсэн. Олж авсан мэдрэгч графикийн шинжилгээг Langmuir загварыг ашиглан ProteOn Manager программд (Bio-Rad) хийсэн.

Хэвлийн макрофагтай хийсэн туршилтаар хэвлийн эсийг зэрлэг төрлийн (C57BL/6) хулганаас ялгаж аваад фторхромтой хавсарсан эсрэгбиемүүдийг ашиглан нэн даруй будсан. Ясны чөмөгний макрофаг авахын тулд ясны чөмөг тусгаарлаж, дараа нь эсийг болзолт орчинд 10 хоногийн турш өсгөвөрлөж (L929 шугам дээр авсан), дараа нь эсийг мөсөн хүйтэн фосфатын буферээр хуванцараас гаргаж авсан.

Будахын өмнө Fc-гамма рецепторыг хааж, дараа нь эсийг A9 эсвэл tA9 эсрэгбие эсвэл буферээр өсгөвөрлөж, дараа нь эсүүдийг угааж, гурван аргын аль нэгээр будсан: 1) hTNF-VnH-ийн поликлональ туулайн эсрэгбие, дараа нь туулайн IgG-ийн хоёрдогч эсрэгбие нь фторохромтой нэгддэг. 2) гексахистидины дараалалд моноклональ хулганы эсрэгбие (Novagen - 70796), дараа нь хулганы IgG-ийн хоёрдогч эсрэгбиемүүд нь фторохромтой нэгддэг. 3) эсүүдэд хүний ​​рекомбинант TNF, дараа нь фторохромоор тэмдэглэгдсэн моноклональ антиNF эсрэгбие (Miltenyi Biotec - клон: cA2) нэмсэн.

Нэмж дурдахад эсүүдийг фторхромтой холбосон анти-P4/80 ба анти-CD 1 фунт эсрэгбиемүүдээр будсан. Дээжийг F ACS Aria (BDBiosciences) эсвэл Guava EasyCyte 8HT (Millipore) дээр шинжилж, гарсан өгөгдлийг FlowJo програм хангамж (Treestar Inc.) ашиглан боловсруулсан.

Макрофагуудын гадаргуу дээр хүний ​​TNF-ийг хадгалах хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9-ийн чадварыг үнэлэх.

Хүний TNF үүсгэдэг хулганаас хэвлийн хөндийн макрофагуудыг тусгаарлаж, 96 цооногтой өсгөвөрлөх ялтсуудад 100 мянган эсээс үржүүлсэн. Эсүүдийг 2 цагийн турш 37С, 5% CO2-т өсгөвөрлөж, дараа нь холбоогүй эсийг фосфатын бүлээн буферээр угаана. Дараа нь эсүүдийг 37С, 5% CO2-т шөнийн турш өсгөвөрлөсөн. 200 мкл бүлээн DMEM-ээр угаасны дараа эсүүдийг 2 мкг/мл концентрацитай А9 эсрэгбиемүүд эсвэл DMEM-ээр 37С-т 30 минутын турш өсгөвөрлөсөн. Дахин угаалга хийсний дараа эсийг 100 нг/мл концентрацитай LPS (Sigma, L2630) -аар өдөөдөг. 4 цагийн дараа өсгөвөрийн дээд давхаргыг цуглуулж, үйлдвэрлэгчийн протоколын дагуу ELISA хэрэгсэл (eBioscience, 88-7346) ашиглан хүний ​​TNF концентрацийг хэмжсэн.

Хүний TNF үүсгэдэг хулганаас ясны чөмөг тусгаарлаж, дараа нь эсийг болзолт орчинд 10 хоногийн турш өсгөвөрлөж (L929 шугам дээр авсан), дараа нь эсийг мөс шиг хүйтэн фосфатын буферээр хуванцараас гаргаж авсан. Амьд эсийн тоог тоолж, 50,000 эсийн концентрацитай 96 цооногийн ялтсуудад суулгасан. Дараа нь эсүүдийг 250 мМ A9 эсрэгбие эсвэл hTNF-VffH нэг домэйн эсрэгбие эсвэл хоосон орчин (DMEM) -ээр дүүргэсэн. Эсүүдийг эсрэгбиемүүдээр 30 минутын турш өсгөвөрлөсөн. Дараа нь худгуудыг фосфат буфертэй давсны уусмалаар угаана. Үүний дараа TNF-ийн үйлдвэрлэлийг 100 нг/мл концентрацитай LPS (Sigma - L2630) -аар өдөөдөг. 4 цагийн дараа супернатантуудыг цуглуулж, тэдгээрийн доторх TNF-ийн концентрацийг дээр дурдсантай төстэй протокол ашиглан хулганы фибросаркомын L929 шугам дээр цитотоксик тест ашиглан хэмжсэн.

Флюресцент мэдрэгч Vhh41-KTNFin vitro болон in vivo-ийн биологийн шинж чанарыг судлах

Тусдаа эсийн популяцид Tnf генийг устгасан хулганы омгуудаас олж авсан туршилтын өгөгдөл дээр үндэслэн янз бүрийн төрлийн иммуноцитын үүсгэсэн TNF-ийн өөр өөр функцүүдийн талаархи таамаглалыг боловсруулсан. Тиймээс саяхан туршилтын сүрьеэгийн халдварын загварт миелоид эс биш харин Т лимфоцитоор үүсгэгдсэн TNF нь өвөрмөц хамгаалалтын функцтэй болохыг харуулсан. Үүнээс гадна манай лаборатори аутоиммун өвчний үед миелоид эсээс TNF-ийн эмгэг төрүүлэгч шинж чанарыг харуулсан өгөгдлийг олж авсан. Эмчилгээний хувьд PMB-ийг бүрэн хориглох нь эдгээр шинж чанарыг харгалздаггүй. Энэхүү таамаглалыг боловсруулахдаа моноцит-макрофагын шугамын эсүүдээс үүссэн TNF-ийн өвөрмөц дарангуйллыг сонгосон бөгөөд энэ нь энэхүү цитокины системийн блокоос ихээхэн давуу талтай байж болно. Ялангуяа B ба T лимфоцитоор үүсгэгдсэн TNF-ийн бүрэн бүтэн дохио нь гаж нөлөөний тохиолдлыг бууруулж, үүнээс гадна TNF хориглогч эмнэлзүйн үр дүнгүй байсан, тэр ч байтугай шалтгаан болж байсан өвчний эсрэг NF эмчилгээг үр дүнтэй болгодог. шинж тэмдгүүд нэмэгдсэн. Нэмж дурдахад, энэ арга нь продюсер эсүүдэд зорилтот хүргэлтийн улмаас шаардлагатай тунг бууруулах боломжтой.

Энэхүү таамаглалыг шалгахын тулд бид нэг хэсэг нь трансмембран молекул F4/80-тай харилцан үйлчлэлийн улмаас макрофагуудын гадаргуутай холбогдож, хоёр дахь өвөрмөц шинж чанараараа тэдний үүсгэсэн TNF-ийг барьж, блоклодог хоёр өвөрмөц эсрэгбие бүтээж, туршсан.

Бис өвөрмөц эсрэгбиемүүдийг молекул клончлох, илэрхийлэх, цэвэршүүлэх. Макрофаг TNF-ийн сонгомол хориглогч болох хоёр өвөрмөц эсрэгбиемийг A9 гэж нэрлэсэн. Үүнийг кодлох генетикийн бүтцийг бий болгохын тулд нэг домайн эсрэг NF блоклох эсрэгбие hTNF-VffH ба макрофаг F4/80 гадаргуугийн маркерын эсрэг нэг гинжин эсрэгбие (scFv) ашигласан (С. Гордон (Оксфордын Их Сургууль). , Их Британи) болон M. Stacey (Их Британи, Лийдсийн их сургууль) Хоёр эсрэгбиемийг кодлодог дарааллыг полимеразын гинжин урвал (ПГУ) ашиглан өсгөж, экспрессийн вектор болгон хуваасан бөгөөд ингэснээр тэдгээр нь ижил унших хүрээ, тэдгээрийн хооронд нуклеотидын дараалал бий болно. уян хатан глицин-серин холбогчийг кодлох (GSGGGGSG) үүссэн.Даралалын С-төгсгөлд гистидиний гексамерыг дараагийн уураг цэвэршүүлэхэд зориулж кодлодог дараалал байна (Зураг 31).

Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9-ийн загвар, түүний үйл ажиллагааны механизмын бүдүүвч дүрслэл, хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9-ийг кодлодог генетикийн бүтцийн бүтэц, хяналтын системийн TNF хориглогч tA9 эсрэгбие. (A) Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 нь хүний ​​TNF-ийн эсрэг нэг домэйн эсрэгбие (VHH) ба моноцит ба макрофаг дээр илэрхийлэгддэг F4/80 гадаргуугийн молекулын эсрэг нэг гинжин эсрэгбиемээс (scFv) бүрдэнэ. (B) Макрофагуудын үүсгэсэн TNF-ийг сонгомол блоклох зарчим: A9 нь макрофагуудын гадаргуутай холбогдож, тэдгээрийн гадаргуугаас ялгарсан TNF-ийг барьж, системийн эргэлтэнд орохоос сэргийлдэг. (B) Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 ба хяналтын системийн TNF хориглогч tA9-ийн генетикийн дизайны схем. Нэг домайн антиNF эсрэгбиеийн генийн дараа уян хатан глицин-серин холбогчийг кодлодог дараалал, дараа нь нэг гинжин эсрэг F4/80 эсрэгбиеийн ген үүсдэг. Үүний дараа гистидин гексамерыг ойр дотны цэвэршүүлэх зорилгоор кодчилдог. Хяналтын эсрэгбие tA9 нь ижил төстэй дараалалтай бөгөөд эсрэгбиеийн эсрэгбиеийн 6 хэт хувьсах бүсийг (Gly3Ser)n төрлийн дараалалаар сольж, эсрэгбиемийг макрофагуудын гадаргуутай холбохоос сэргийлж, эсрэгбие болгон хувиргадаг. системийн TNF дарангуйлагч.

Макрофагуудаар үүсгэгдсэн TNF-ийн тусгай блокаторын үр нөлөөг судлахын тулд хяналтын системийн хориглогч шаардлагатай байв. Эсрэгбиеийн наалдамхай байдлын зөрүүтэй холбоотой үр дагавраас зайлсхийхийн тулд A9 TNF-тай ижил төстэй блоклогчийг ашиглахаар шийдсэн. Хагас задралын хугацаанд нөлөөлж болох бусад хүчин зүйлс, тухайлбал изоэлектрик цэг ба молекулын жингийн нөлөөллөөс зайлсхийхийн тулд хяналтын эсрэгбие нь анхдагч амин хүчлийн дараалалд аль болох ойр байх ёстой. Тиймээс бид A9-тэй ижил бүтэцтэй, амин хүчлийн дараалалтай хяналтын эсрэгбие - tA9-ийг бүтээсэн ба түүний эсрэг P4/80 scFv дахь хэт хувьсах 6 бүсийг (Gly3Ser)n хэлбэрийн дараалалаар сольсон. анхны CDR бүсүүдтэй ижил урттай (Зураг 31 В-ийг үз).

Хоёр эсрэгбиемийг бактерийн системд илэрхийлж, ойрын хроматографийн аргаар цэвэршүүлсэн.

Электрофоретик хөдөлгөөн ба HPLC-ийн өгөгдлөөр тодорхойлсон эсрэгбие А9-ийн хэмжээ нь тооцоолсон 45 кДа молекулын масстай тохирч байна (Зураг 32). хроматографи. Зүүн талд уургийн молекулын жин байна. (B) Молекулын жингийн тэмдэглэгээний хроматограмм дээр давхарласан хоёр өвөрмөц эсрэгбие А9-ийн хроматограмм (улаан өнгөтэй). (B) Молекулын шилжилтийн хугацааны функц нь молекулын жингийн функц. Хоёр өвөрмөц эсрэгбие А9-ийн тооцоолсон молекул жин нь 43.4 кДа байв.

A9 ба tA9 эсрэгбиемүүдийн рекомбинант хүний ​​TNF-тэй харилцан үйлчлэл. A9 ба tA9 эсрэгбиемүүдийн хүний ​​рекомбинант TNF-тэй харилцан үйлчлэлийн кинетикийг гадаргуугийн плазмоны резонансаар хэмжсэн. Үүнийг хийхийн тулд 50 нМ концентрацитай хоёр эсрэгбиемийг мэдрэгчийн чипний гадаргуу дээр хөдөлгөөнгүй болгож, дараа нь 50-3 нМ-ийн цуваа шингэрүүлэлт дэх хүний ​​рекомбинант TNF-ийг аналитик болгон хэрэглэж, харилцан үйлчлэлийн кинетикийг ProteOn дээр хэмжсэн. XPR36 төхөөрөмж. Хоёр эсрэгбие хоёулаа өндөр хамааралтай байсан: A9 ба tA9-ийн Kd нь 85 ба 95 pM байв. Энэ нь нэвтрүүлсэн мутаци нь TNF холболтод нөлөөлөөгүйг баталж байна. Нэмж дурдахад, эсрэгбие хоёулаа холбох хурд (Kforward, on-rate) ба диссоциацийн хурд (Kreverse, off-rate) ижил төстэй үзүүлэлттэй байсан - Зураг дээр үзүүлэв. 33 болон Tab дээр. 3. Удаан диссоциацийн хурд нь A9 эсрэгбие нь TNF-ийг хадгалах боломжийг олгоно.

Хүний TNF-тэй тусгайлан холбогддог боловч түүний биологийн идэвхийг хаадаггүй шинэ рекомбинант нэг домэйны эсрэгбиеийн үйлдвэрлэл ба шинж чанар.

A9 ба tA9 эсрэгбиемүүдийн хүний ​​рекомбинант TNF-тэй харилцан үйлчлэлийн кинетикийг гадаргуугийн плазмоны резонансаар хэмжсэн. Үүнийг хийхийн тулд 50 нМ концентрацитай хоёр эсрэгбиемийг мэдрэгчийн чипний гадаргуу дээр хөдөлгөөнгүй болгож, дараа нь 50-3 нМ-ийн цуваа шингэрүүлэлт дэх хүний ​​рекомбинант TNF-ийг аналитик болгон хэрэглэж, харилцан үйлчлэлийн кинетикийг ProteOn дээр хэмжсэн. XPR36 төхөөрөмж. Хоёр эсрэгбие хоёулаа өндөр хамааралтай байсан: A9 ба tA9-ийн Kd нь 85 ба 95 pM байв. Энэ нь нэвтрүүлсэн мутаци нь TNF холболтод нөлөөлөөгүйг баталж байна. Нэмж дурдахад, эсрэгбие хоёулаа холбох хурд (Kforward, on-rate) ба диссоциацийн хурд (Kreverse, off-rate) ижил төстэй үзүүлэлттэй байсан - Зураг дээр үзүүлэв. 33 болон Tab дээр. 3. Удаан диссоциацийн хурд нь A9 эсрэгбие нь TNF-ийг хадгалах боломжийг олгоно.

Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 ба хяналтын эсрэгбие tA9 хүний ​​рекомбинант TNF-тэй харилцан үйлчлэлийн кинетик. (A) Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 болон хяналтын эсрэгбие tA9 хөдөлгөөнгүй болсон мэдрэгчийн чиптэй 50 нМ - 3 нМ концентрацитай хүний ​​рекомбинант TNF-ийн харилцан үйлчлэлийн муруйг (сенсограмм) үзүүлэв. Абсцисса тэнхлэг нь цаг хугацааг секундээр, ордны тэнхлэг нь ердийн нэгжээр (CU) резонансын өнцгийн шилжилтийг харуулдаг. (B) Сенсорограммын бүлэг тус бүрийн хувьд холболтын хурд (op-rate), диссоциацийн хурд (off-rate) ба диссоциацийн тогтмол (Kd) утгыг тооцоолсон. Үүссэн дундаж утгууд болон стандарт хазайлтыг (SD) изоаффиний диаграмм дээр дүрсэлсэн болно. Диагональ шугамууд нь заагдсан диссоциацийн тогтмол утгуудтай тохирч байна.

TNF-ийн биологийн нөлөөг дарангуйлах A9 эсрэгбиеийн харьцуулсан үйл ажиллагааг үнэлэхийн тулд цитотоксик шинжилгээг L929 хулганы фибросаркомын шугамд хийсэн. A9 ба tA9 эсрэгбиеийн цуваа шингэрүүлэлтийг хүний ​​рекомбинант TNF болон актиномицин-D-ийн тогтмол концентрацид нэмсэн. Олж авсан мэдээллээс үзэхэд A9 ба tA9 эсрэгбие нь NF-ийн эсрэг үйлчилгээтэй төстэй (Зураг 34 А). Нэмж дурдахад, хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9-ийн идэвхжил нь A9 ба tA9-ийн нэг хэсэг болох нэг домэйны эсрэг NF эсрэгбие hTNF-VffH-ийн үйл ажиллагаатай тохирч байгаа нь батлагдсан (Зураг 34 B). 10 10 10

Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9, хяналтын эсрэгбие mA9 болон нэг домэйны эсрэгбие hTNF-VffH-ийн эсрэг NF идэвхжил. (A) Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 ба хяналтын эсрэгбие tA9-ийн үйл ажиллагааны харьцуулалт. Хүний TNF-ийн тогтмол тун ба A9 ба mA9 эсрэгбиеийн тунг бууруулж байх үед хулганы фибросаркома L929 эсийн амьд үлдэх муруйг үзүүлэв. (B) Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 ба нэг домэйн эсрэгбие hTNF-VnH-ийн үйл ажиллагааны харьцуулалт. Хүний TNF-ийн тогтмол тун ба A9 ба hTNF-VHH эсрэгбиеийн бууралтын тунг нэгэн зэрэг хэрэглэснээр хулганы фибросаркома L929 эсийн амьд үлдэх муруйг үзүүлэв.Молийн массын ялгааны нөлөөллийг арилгахын тулд харьцуулалтыг молийн концентрациар хийсэн. эсрэгбиеийн тодорхойлсон үйл ажиллагааны талаар.

F4/80 гадаргуугийн молекултай харилцан үйлчлэлцэх замаар макрофагуудын гадаргуутай A9 ба tA9 эсрэгбиемүүдийг холбох шинжилгээ.

Хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9-ийн макрофагуудын гадаргуутай тусгайлан холбогдох чадварыг урсгалын цитометрээр үнэлэв. Үүнийг хийхийн тулд хэвлийн хөндийгөөс тусгаарлагдсан эсүүдийг A9 эсрэгбиемүүдээр өсгөвөрлөж, дараа нь макрофаг тэмдэглэгээ CD1 lb ба F4/80-аар будсан бол хоёр өвөрмөц А9 эсрэгбиемийг VHH OR эсрэгбиемүүдийн эсрэгбиемүүдээр тусгай будалт хийсэн. полихистидин шошго. Дараа нь дээжийг урсгалын цитометр, шинжилгээнд хамруулсан.

Эдгээр туршилтууд нь хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 нь F4/80 болон CD1 фунт (моноцит ба макрофаг) -ийг илэрхийлдэг хэвлийн эсийн гадаргуутай холбогдох чадвартай болохыг харуулсан (Зураг 35 A - D). Үүний зэрэгцээ, A9 нь эдгээр тэмдэглэгээгүй хэвлийн хөндийн эсүүдтэй холбогддоггүй (гол төлөв лимфоцитууд) (Зураг 35 E ба F). Зорилтот объекттой холбогдохын тулд хоёр эсрэгбие хоорондын өрсөлдөөний улмаас A9 эсрэгбиемийг нэмэхэд зэрэгцээ эсрэг F4/80 будгийн түвшин буурч байгаа нь A9 нь эсийн гадаргуу дээрх энэ молекултай тусгайлан харьцдаг болохыг баталж байна (Зураг 35 G ба 3). .

Мас-1 гэсэн нэрийг бас ашигладаг. Комплемент системийн S3 бүрэлдэхүүн хэсгийн рецепторын бүрэлдэхүүн хэсэг. Хулганад моноцит, макрофаг, микроглиал эсүүдээр илэрдэг. хоёр өвөрмөц эсрэгбие

Хэвлийн хөндийн эсүүдийг хоёр өвөрмөц эсрэгбиетэй эсвэл A9-тэй (улаанаар харуулсан) өсгөвөрлөж, дараа нь моноцит-макрофаг эсүүдэд зориулсан гадаргуугийн маркеруудад флюресцентээр тэмдэглэсэн эсрэгбиемүүд болон A9-ийн өвөрмөц эсрэгбиемүүдээр будсан. Дараа нь олж авсан дээжийг урсгалын цитометрээр шинжлэв. (A, B, E, G) VHH домэйны эсрэгбиемүүдээр будах. (B, D, E, 3) полигексидины дарааллын эсрэгбиемүүдээр будах. (A, B) хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 нь F4/80 болон CD1 lb (макрофаг)-ийн өндөр түвшний илэрхийлэлд зориулж сонгосон эсүүдтэй холбогддог. Үзүүлсэн гистограммд хэвтээ тэнхлэг нь A9 дээрх будгийн суваг дахь флюресценцийн утгыг, босоо тэнхлэг нь үйл явдлын хэвийн давтамжийг харуулж байна. (C, D) тархалтын гистограм хэлбэрээр ижил байна. Хэвтээ тэнхлэг нь A9 дээр будах суваг дахь флюресценцийн утгыг, босоо тэнхлэг нь F4/80 дээр будах суваг дахь флюресценцийн утгыг харуулна. (D, F) -хос өвөрмөц эсрэгбие A9 нь F4/80 болон CD1 фунт (лимфоцит)-ийг илэрхийлдэггүй хэвлийн хөндийн эсүүдтэй холбогддоггүй. Үзүүлсэн гистограммд хэвтээ тэнхлэг нь A9 дээрх будгийн суваг дахь флюресценцийн утгыг, босоо тэнхлэг нь үйл явдлын хэвийн давтамжийг харуулж байна. (G, 3) - А9 хоёр өвөрмөц эсрэгбиетэй инкубаци хийх нь F4/80-ийн будгийн эрчмийг бууруулдаг. Үзүүлсэн гистограммд хэвтээ тэнхлэг нь будгийн суваг дахь флюресценцийн утгыг F4/80, босоо тэнхлэг нь үйл явдлын хэвийн давтамжийг харуулж байна.

Ясны чөмөгний макрофагуудыг хоёр өвөрмөц А9 эсрэгбиемээр (улаанаар харуулсан), үүнгүйгээр (цэнхэрээр харуулсан) эсвэл хяналтын tA9 эсрэгбиемээр (хараар харуулсан) өсгөвөрлөж, дараа нь A9/tA9 өвөрмөц эсрэгбиемээр будсан. Хүлээн авсан дээжийг урсгалын цитометрийн аргаар шинжлэв. (A) Хоёр өвөрмөц эсрэгбие А9 нь ясны чөмөгний макрофагуудтай тусгайлан холбогддог. Үзүүлсэн гистограммд хэвтээ тэнхлэг нь A9 дээрх будгийн суваг дахь флюресценцийн утгыг, босоо тэнхлэг нь үйл явдлын хэвийн давтамжийг харуулж байна. (B) хяналтын эсрэгбие wA9 нь ясны чөмөгний макрофагуудтай холбогдож чадахгүй. Үзүүлсэн гистограммд хэвтээ тэнхлэг нь wA9 дээрх будгийн суваг дахь флюресценцийн утгыг, босоо тэнхлэг нь үйл явдлын хэвийн давтамжийг харуулж байна.

Нэмж дурдахад, нэмэлт цитофлюрометрийн туршилтууд нь макрофагуудын гадаргуу дээр наалдсан үед A9 эсрэгбие нь хүний ​​экзогеноор нэмэгдсэн TNF-ийг нэгэн зэрэг холбох чадвартай болохыг харуулсан (Зураг 37). Энэ нь хоёр өвөрмөц эсрэгбиеийн дэд нэгж хоёулаа нэгэн зэрэг функциональ идэвхтэй байдаг бөгөөд хоёр эсрэгтөрөгчийг нэгэн зэрэг холбох нь стерикийн хувьд боломжтой гэдгийг баталж байна.

Хэвлийн хөндийн эсүүдийг хоёр өвөрмөц эсрэгбиетэй эсвэл A9-тэй (улаанаар харуулсан), дараа нь хүний ​​​​рекомбинант TNF-тай өсгөвөрлөж, дараа нь моноцит-макрофаг эсийн гадаргуугийн маркеруудад флюресцентээр тэмдэглэгдсэн эсрэгбиемүүд, түүнчлэн хүний ​​​​TNF-ийн өвөрмөц эсрэгбиемүүдээр будсан. Хүлээн авсан дээжийг урсгалын цитометрийн аргаар шинжлэв. (A) хоёр өвөрмөц эсрэгбие A9 нь макрофагуудын гадаргуу дээр хүний ​​TNF-ийг хадгалах чадвартай (F4/80 ба CD1 фунт экспрессийн өндөр түвшинд сонгосон эсүүд). Үзүүлсэн гистограммд хэвтээ тэнхлэг нь TNF будгийн суваг дахь флюресценцийн утгыг, босоо тэнхлэг нь үйл явдлын хэвийн давтамжийг харуулж байна. (B) Тарсан гистограм хэлбэрийн ижил өгөгдөл. Хэвтээ тэнхлэг нь TNF будгийн суваг дахь флюресценцийн утгыг, босоо тэнхлэг нь F4/80 будгийн суваг дахь флюресценцийн утгыг харуулна.

Уургийн инженерчлэл 6 Уургийг судлах, шинэ шинж чанар бүхий уураг олж авах арга, арга барилын багц ҮНДСЭН АЖИЛЛАГАА Нуклеотид ба амин хүчлийн дарааллын клон сан үүсгэх Амин хүчлийн үлдэгдлийг дангаар орлуулах нь уургийн нугалах, үйл ажиллагаанд үзүүлэх нөлөөг судлах. шаардлагатай шинж чанарыг өгөх уураг шаардлагатай шинж чанар бүхий уургийг илрүүлэх, сонгох арга, арга барилыг боловсруулах

Рационал дизайн Уургийн орон зайн зохион байгуулалтын талаархи мэдлэгийн хэрэгцээ Молекул хоорондын харилцан үйлчлэлийн талаархи мэдлэгийн хэрэгцээ Арга, тоног төхөөрөмжийн төгс бус байдал нь орон зайн дизайнаар шинэ уураг үүсгэхэд чиглэсэн чиглэл юм.

Уургийн молекулын чиглэсэн хувьсал гэдэг нь сонгох замаар шинэ уураг үүсгэхэд чиглэгдсэн чиглэл юм 1 санамсаргүй амин хүчлийн дарааллын санг олж авах 2 шаардлагатай шинж чанарын бага зэрэгтэй полипептидийн гинжийг сонгох 3 санамсаргүй мутагенез ашиглан уургийн шинэ санг олж авах. дараагийн шатны сонгон шалгаруулалтад эсвэл шинэ уураг илэрхийлэх генийн инженерчлэгдсэн бүтцийг ашиглана

Уургийн молекулуудын чиглэсэн хувьсал (сонголтууд) чиглэсэн мутагенезийг ашиглан оновчтой дахин төлөвлөх нь уургийн гадаргуугийн ферментийн инженерчлэлийн идэвхтэй төвд байгаа тодорхой амин хүчлийн үлдэгдлийг солих мутаци ашиглан полипептидийн гинжин хэлхээний хэсгүүдийг өөрчилдөг. уургийн бөмбөрцгийн гадаргуу, гэхдээ бие биенээсээ хол полипептидийн гинжин хэлхээнд нэлээд зайд байрладаг.

Заасан шинж чанартай уургийн скрининг, сонгон шалгаруулах санамсаргүй скрининг сайжруулсан скрининг сонгох Уураг бүрийг шаардлагатай шинж чанарууд байгаа эсэхийг шалгадаг; номын сангаас уураг сонгох нь санамсаргүй байдлаар явагддаг, уураг бүрийг шаардлагатай шинж чанарууд байгаа эсэхийг шалгадаг; номын сангаас уураг сонгох нь санамсаргүй байдлаар явагддаг; номын санг бүрдүүлж буй объектууд нь фенотипийн хувьд ялгаатай байх боломжтой (жишээлбэл, ферментийн идэвхжил байгаа тохиолдолд); номын сангийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг сонгон хадгалах нөхцлийг бүрдүүлдэг. тодорхой шинж чанарууд (фаг, эсийн дэлгэц); номын сангийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг сонгон хадгалах нөхцлийг бүрдүүлдэг; тодорхой шинж чанартай байдаг (фаг, эсийн дэлгэц) -ийг бүрдүүлдэг олон тооны макромолекулуудын дунд шаардлагатай шинж чанартай уураг илрүүлэх. үүссэн клон номын сан

Фагийн дүрслэл Фагийн гадаргуу дээр гадны уургийг харуулах зорилготой.Энэ аргыг 1985 онд судалтай бактериофаг M13-д зориулан боловсруулсан. (pIII ба pVIII генүүд нь гадаад cDNA фрагментийг оруулахад тохиромжтой зорилтот газрууд юм) Зорилго нь фагийн гадаргуу дээр гадны уургийг ил гаргах явдал юм.Энэ аргыг 1985 онд судалтай бактериофаг M13-д зориулан боловсруулсан. (pIII ба pVIII генүүд нь гадаад cDNA фрагментийг оруулахад тохиромжтой зорилтот цэгүүд юм) бактериофагийн зорилтот уураг болон фагийн бүрхүүлийн уургийн аль нэгийг кодлох дарааллаас бүрдсэн эрлийз генийг бүтээдэг; E. coli нь фагийн үед халдварладаг. угсралт; эрлийз уургууд нь фагийн бөөмд багтдаг

Фагмид Туслах фаг Фагийн геном E.coli-ийн туслах фагтай халдварлах Плазмид номын сан/фагемидын тусламжтайгаар хувирсан E.coli эсүүд нь туслах фагаар халдварлуулж, гадаргуу дээр нь зорилтот уургийн янз бүрийн хувилбарууд E ил гарсан фагийн тоосонцорыг олж авдаг. плазмидын номын сан / фагемидын тусламжтайгаар хувирсан коли эсүүд нь туслах фагаар халдварладаг бөгөөд тэдгээрийн гадаргуу дээр зорилтот уургийн янз бүрийн хувилбарууд ил гарсан фагийн хэсгүүдийг олж авдаг.

Уургийн инженерчлэлийн практик хэрэглээний хэтийн төлөв Анагаах ухаан: *шинэ эм үйлдвэрлэхэд; оношлогооны хэрэгсэл бий болгох, вакцин үйлдвэрлэх; *дархлааны хариу урвалын механизм, түүнчлэн дархлааны тогтолцооны өвчнийг судлахад Экологи: *биокатализаторыг гадаргуу дээр нь хөдөлгөөнгүй болгосон фермент бүхий бүхэл эс хэлбэрээр авах; *оношлогоо, орчны хяналт шинжилгээний биосенсор авах; *орчноос хорт бодис, хүнд металлын ионыг зайлуулах био шингээгчийг бий болгоход зориулагдсан

Ферментийн электрод ашиглан глюкозыг хэмжих (Л. Кларкийн туршилтын бүдүүвч дүрслэл). Хүчилтөрөгчийн дэргэд глюкозын оксидаза ферментээр глюкозыг исэлдүүлэх: глюкоз + O 2 H 2 O 2 + глюконо-1,5-лактон. H 2 O 2 нь цагаан алтны электрод дээр +700 мВ-ын потенциал дээр буурдаг; хэлхээнд урсах гүйдэл нь устөрөгчийн хэт ислийн (өөрөөр хэлбэл шууд бусаар глюкоз) концентрацитай пропорциональ байна.

Толь бичиг Элюц Элюц гэдэг нь бодисыг (вирус) хатуу зөөвөрлөгчөөс гаргаж авах арга юм Үзүүлэлтийн арга Дэлгэцийн арга нь вирус, эс эсвэл эсгүй өсгөврийн гадаргуу дээр уураг, пептидийг сонгохдоо гетеролог уураг/пептидүүдийг үзүүлэх арга юм. Шаардлагатай шинж чанаруудтай Биосенсор Биосенсор - шинжилгээний дээж дэх бодисыг илрүүлэх, тэдгээрийн концентрацийг тооцоолох боломжийг олгодог аналитик систем (биологийн материал + хувиргагч) Элюц Элюц нь хатуу зөөвөрлөгчөөс бодис (вирус) гаргаж авах арга юм. Дэлгэцийн арга Дэлгэцийн арга нь вирус, эс эсвэл эсгүй өсгөвөрийн гадаргуу дээр гетеролог уураг/пептидүүдийг үзүүлэх арга бөгөөд шаардлагатай шинж чанар бүхий уураг эсвэл пептидийг сонгох Biosensor Биосенсор нь аналитик систем (биологийн материал + хувиргагч) юм. туршилтын дээжинд байгаа бодисыг илрүүлэх, тэдгээрийн концентрацийг тооцоолох

Уургийн инженерчлэл 4 Уургийг судлах, шинэ шинж чанар бүхий уураг олж авах арга, арга барилын багц ҮНДСЭН АЖИЛЛАГАА Нуклеотид ба амин хүчлийн дарааллын клон сан үүсгэх Амин хүчлийн үлдэгдлийг дангаар орлуулах нь уургийн нугалах, үйл ажиллагаанд үзүүлэх нөлөөг судлах Уургийг үр дүнтэй өөрчлөх аргыг боловсруулах. шаардлагатай шинж чанарыг өгөх уураг шаардлагатай шинж чанар бүхий уургийг илрүүлэх, сонгох арга, арга барилыг боловсруулах

Рационал дизайн Уургийн орон зайн зохион байгуулалтын талаархи мэдлэгийн хэрэгцээ Молекул хоорондын харилцан үйлчлэлийн талаархи мэдлэгийн хэрэгцээ Арга, тоног төхөөрөмжийн төгс бус байдал нь орон зайн дизайнаар шинэ уураг үүсгэхэд чиглэсэн чиглэл юм.

Уургийн молекулын чиглэсэн хувьсал гэдэг нь сонгох замаар шинэ уураг үүсгэхэд чиглэгдсэн чиглэл юм 1 санамсаргүй амин хүчлийн дарааллын санг олж авах 2 шаардлагатай шинж чанарын бага зэрэгтэй полипептидийн гинжийг сонгох 3 санамсаргүй мутагенез ашиглан уургийн шинэ санг олж авах. дараагийн шатны сонгон шалгаруулалтад эсвэл шинэ уураг илэрхийлэх генийн инженерчлэгдсэн бүтцийг ашиглана

Уургийн молекулуудын чиглэсэн хувьсал (сонголтууд) чиглэсэн мутагенезийг ашиглан оновчтой дахин төлөвлөх нь уургийн гадаргуугийн ферментийн инженерчлэлийн идэвхтэй төвд байгаа тодорхой амин хүчлийн үлдэгдлийг солих мутаци ашиглан полипептидийн гинжин хэлхээний хэсгүүдийг өөрчилдөг. уургийн бөмбөрцгийн гадаргуу, гэхдээ бие биенээсээ хол полипептидийн гинжин хэлхээнд нэлээд зайд байрладаг.

Заасан шинж чанартай уургийн скрининг, сонгон шалгаруулах санамсаргүй скрининг сайжруулсан скрининг сонгох Уураг бүрийг шаардлагатай шинж чанарууд байгаа эсэхийг шалгадаг; номын сангаас уураг сонгох нь санамсаргүй байдлаар явагддаг, уураг бүрийг шаардлагатай шинж чанарууд байгаа эсэхийг шалгадаг; номын сангаас уураг сонгох нь санамсаргүй байдлаар явагддаг; номын санг бүрдүүлж буй объектууд нь фенотипийн хувьд ялгаатай байх боломжтой (жишээлбэл, ферментийн идэвхжил байгаа тохиолдолд); номын сангийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг сонгон хадгалах нөхцлийг бүрдүүлдэг. тодорхой шинж чанарууд (фаг, эсийн дэлгэц); номын сангийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг сонгон хадгалах нөхцлийг бүрдүүлдэг; тодорхой шинж чанартай байдаг (фаг, эсийн дэлгэц) -ийг бүрдүүлдэг олон тооны макромолекулуудын дунд шаардлагатай шинж чанартай уураг илрүүлэх. үүссэн клон номын сан

Фагийн дүрслэл Фагийн гадаргуу дээр гадны уургийг харуулах зорилготой.Энэ аргыг 1985 онд судалтай бактериофаг M13-д зориулан боловсруулсан. (pIII ба pVIII генүүд нь гадаад cDNA фрагментийг оруулахад тохиромжтой зорилтот газрууд юм) Зорилго нь фагийн гадаргуу дээр гадны уургийг ил гаргах явдал юм.Энэ аргыг 1985 онд судалтай бактериофаг M13-д зориулан боловсруулсан. (pIII ба pVIII генүүд нь гадаад cDNA фрагментийг оруулахад тохиромжтой зорилтот цэгүүд юм) бактериофагийн зорилтот уураг болон фагийн бүрхүүлийн уургийн аль нэгийг кодлох дарааллаас бүрдсэн эрлийз генийг бүтээдэг; E. coli нь фагийн үед халдварладаг. угсралт; эрлийз уургууд нь фагийн бөөмд багтдаг

Фагмид Туслах фаг Фагийн геном E.coli-ийн туслах фагтай халдварлах Плазмид номын сан/фагемидын тусламжтайгаар хувирсан E.coli эсүүд нь туслах фагаар халдварлуулж, гадаргуу дээр нь зорилтот уургийн янз бүрийн хувилбарууд E ил гарсан фагийн тоосонцорыг олж авдаг. плазмидын номын сан / фагемидын тусламжтайгаар хувирсан коли эсүүд нь туслах фагаар халдварладаг бөгөөд тэдгээрийн гадаргуу дээр зорилтот уургийн янз бүрийн хувилбарууд ил гарсан фагийн хэсгүүдийг олж авдаг.

Уургийн инженерчлэлийн практик хэрэглээний хэтийн төлөв Анагаах ухаан: *шинэ эм үйлдвэрлэхэд; оношлогооны хэрэгсэл бий болгох, вакцин үйлдвэрлэх; *дархлааны хариу урвалын механизм, түүнчлэн дархлааны тогтолцооны өвчнийг судлахад Экологи: *биокатализаторыг гадаргуу дээр нь хөдөлгөөнгүй болгосон фермент бүхий бүхэл эс хэлбэрээр авах; *оношлогоо, орчны хяналт шинжилгээний биосенсор авах; *орчноос хорт бодис, хүнд металлын ионыг зайлуулах био шингээгчийг бий болгоход зориулагдсан

Ферментийн электрод ашиглан глюкозыг хэмжих (Л. Кларкийн туршилтын бүдүүвч дүрслэл). Хүчилтөрөгчийн дэргэд глюкозын оксидаза ферментээр глюкозыг исэлдүүлэх: глюкоз + O 2 H 2 O 2 + глюконо-1,5-лактон. H 2 O 2 нь цагаан алтны электрод дээр +700 мВ-ын потенциал дээр буурдаг; хэлхээнд урсах гүйдэл нь устөрөгчийн хэт ислийн (өөрөөр хэлбэл шууд бусаар глюкоз) концентрацитай пропорциональ байна.

Тайлбар толь Хөдөлгөөнгүй болгох Хөдөлгөөнгүйжүүлэх гэдэг нь молекулуудын хөдөлгөөнийг хязгаарлах, тэдгээрийн зохицуулалтыг баталгаажуулах явдал юм Аэротанк Аэротанк нь бохир ус цэвэрлэх систем, ус, бичил биетний лаг, агаар холилдсон усан сан юм. Агааргүй нөхцөлд био нөхөн сэргээлт Биологийн объектууд - ургамал, мөөгөнцөр, шавьж, өт болон бусад организмын бодисын солилцооны чадавхийг ашиглан ус, хөрс, агаар мандлыг цэвэршүүлэх аргуудын цогц юм Хөдөлгөөнгүй болгох Хөдөлгөөнгүй болгох нь молекулуудын хөдөлгөөнийг хязгаарлах, тэдгээрийн зохицуулалтыг баталгаажуулах Аэротанк юм. Аэротанк нь бохир ус цэвэршүүлэх систем, ус, бичил биетний лаг, агаар холилдох усан сан юм Digester Digester нь агааргүй нөхцөлд бактери ашиглан органик бохирдуулагчийг биологийн аргаар боловсруулах усан сан юм. биологийн объектуудын бодисын солилцооны чадавхийг ашиглан агаар мандал - ургамал, мөөгөнцөр, шавьж, өт болон бусад организм

Ферментийн ангилал Анги Катализаторын урвал Ферментийн жишээ Оксидоредуктаза Редукцийн болон исэлдэлтийн урвал 200 гаруй ферментийг мэддэг. Каталаза, глюкозын оксидаза Трансфераза Атомын бүлгүүдийг донороос хүлээн авагч руу буцаах боломжтой. 450 гаруй ферментийг мэддэг. Пируват киназ, уураг киназ Гидролаз Гидролизийн урвал 200 гаруй гидролаз мэдэгдэж байна. Протеаза, амилаза, целлюлаза Лиазууд Субстратаас атомын бүлгүүд гидролизийн бус задралд орж давхар холбоо үүсгэнэ.100 гаруй лиаза нь мэдэгдэж байна. Аспартаза, фумараза изомераза Органик нэгдлүүдийг дахин зохион байгуулах молекулын урвал 50 гаруй ферментийг мэддэг. Глюкоз имераз Лигазууд Хоёр өөр молекулыг хооронд нь холбох урвал 100 гаруй мэдэгдэж байгаа ДНХ лигаза, триптофан синтетаза.

Бичил биетүүд Ферментийн эх үүсвэр Бацилли нь рибонуклеаза, дезоксирибонуклеаза, протеазын биосинтез, мөөгөнцөр-глюкоамилаза, инвертаза, хүчиллэг фосфатазын ургамал Амилазаг арвайгаас, төмсөөс хүчиллэг фосфатаза, малын калориген дезоксидаза, адууны пероксидаза дезоксидаза, алигидролактаас алигидразаза. фосфатаза нь ходоодноос тусгаарлагдсан байдаг. Гахайн ходоодыг пепсин авахын тулд үхрийн зүрхнээс лактатдегидрогеназыг, ходоодноос шүлтлэг фосфатазыг ялгаж авдаг. Гахайн ходоодыг пепсин үйлдвэрлэхэд ашигладаг

Хөдөлгөөнгүй болгох арга Физик арга Химийн аргууд нь уусдаггүй зөөгчийг шингээх, гельний нүхэнд оруулах, хагас нэвчүүлэх мембран ашиглан орон зайн тусгаарлах болон бусад аргууд нь фермент ба тээвэрлэгчийн хооронд шинэ ковалент холбоо үүсгэхэд суурилдаг.

Хөдөлгөөнгүй ферментийн давуу тал нь урвалын орчноос ферментийг салгаж, урвалыг зөв цагт зогсоож, ферментээр бохирдоогүй бүтээгдэхүүнийг олж авах; процессыг тасралтгүй горимд явуулж, урвалын хурдыг зохицуулах; катализаторын шинж чанар, түүний өвөрмөц байдал, урвалын нөхцлөөс хамаарах байдал, денатурацийн нөлөөнд мэдрэмтгий байдлыг өөрчлөх; тээвэрлэгчид нөлөөлөх замаар ферментийн катализаторын үйл ажиллагааг зохицуулах

Биотехнологийн үйлдвэрлэлийн ферментүүд Ферментийн эх үүсвэр, хөдөлгөөнгүй болгох арга Биотехнологи Ацетил нейтраминат -9-фосфатын синтаза Энзим E. coli. Полиакриламидын гель болгон оруулах. Сиалийн хүчлүүдийн нийлэгжилт. Тунхууны пероксидаза фермент. Гель дэх алгинатыг сополимержуулах, оруулах. Бохир ус дахь фенолын исэлдэлт. 3-Кетостероид дегидрогеназа Mycobacterium globiformis эсүүд. Полиакриламидын гель болгон оруулах. Гидрокортизоныг преднизолон болгон хувиргах

Лавряшина М.Б. KemSU Байгаль орчны биотехнологийн аргууд Биологийн бохир усыг цэвэрлэх Био(фито)засах Биологийн аюулгүй шавьж, гербицид бий болгох Био аюулгүй шавьж устгах бодис, гербицид бий болгох Байгаль орчинд ээлтэй эрчим хүч үйлдвэрлэх Өвчинд тэсвэртэй хөдөө аж ахуйн ургамал бий болгох Металлуудыг бактерийн аргаар уусгах Ховордсон болон устаж үгүй ​​болсон амьтдыг клонжуулах

Бохир ус цэвэрлэх арга Механик (тунгаах, шүүх) Механик Химийн (урвалж бодист өртөх) Химийн Физик-химийн Биологийн (биохимийн өөрөө өөрийгөө цэвэршүүлэх) Биологийн Биологийн биотехнологийн хамгийн чухал асуудал бол бохир усыг цэвэрлэх явдал юм.

Аэротанкууд нь нэгэн төрлийн болгогч, тунгаагуур, лаг сэргээгч, лаг нягтруулагч (пресс)-тэй хамтран ажилладаг. Aerotank Aerotank (аэро болон англи савны сав, танкаас) тунгаагуурын нэгэн төрлийн тохируулагч AEROTENK лаг сэргээгч пресс цэвэршүүлсэн бохир ус идэвхижүүлсэн лаг бохир ус хайлуулах төхөөрөмж

Digester Digester (метан ба англи савнаас - сав, сав) Бактерийн бүлгүүд Анхдагч бодисууд ГИДРОЛИТ АЦЕТОГЕН Органик бохирдуулагчид Өндөр өөхний хүчил УС төрөгч ҮЙЛДВЭРЛҮҮЛЭГЧ Өөх тосны хүчлүүд H 2, CO 2, CH 3 COOH МЕТАН ҮҮСГЭГЧ H2, 3 COOH CH 4, CO 2

Метан исгэх үе шатууд 1 Полимерийн биогидролиз ба ацидогенез (органик бодисууд нь дээд өөхний хүчил, ацетат, устөрөгч болж хувирдаг) 2 ацетогенез ба устөрөгчжилт (өндөр тосны хүчлээс ацетат, устөрөгч үүсдэг) ​​3 Метаногенез (метан, устөрөгч, нүүрстөрөгчийн давхар исэл үүсдэг) ацетатаас)

I үе шат. ЦЕЛЛУЛОЗИЙГ УСТГАХ (Bacterioides ruminicola, Butyrivibrio fibriosolvens) УУРАГИЙН УУРАГ (Clostridium, Petrococcus) II үе шат. ACETOGENIC (Syntrophobacter wolinii) III үе шат. МЕТАН ҮҮСГЭГЧ (Metanobacterium thermoautotrophicum, Metanococcus vannielii) Бичил биетний жишээ

БИОРЕМИДИАЦИ Энэ арга нь бичил биетний нийлмэл органик бодисыг задрах замаар энгийн "биологийн хувьд аюулгүй" бодис болгон ашиглах чадварт суурилдаг Молекул биологи, генетик Экологи инженерчлэл Микробиологи БИОРРЕДИАЦИ

Биологийн нөхөн сэргээлт. Арга хандлага. Байгалийн "зэрлэг" бичил биетний үйл ажиллагааг ашиглах Байгалийн "зэрлэг" бичил биетний үйл ажиллагааг ашиглах (эрчимжүүлэгч шаардлагатай, жишээлбэл, O 2) Биологийн бүтээгдэхүүн хэлбэрээр нэвтрүүлсэн идэвхтэй омог ашиглан бохирдол ихтэй газруудад

Бохирдсон газар нутгийн биологийн олон янз байдлыг судлах Устгасан бохирдуулагчийг устгах чадвартай микрофлорыг тусгаарлах Орон нутгийн микрофлорыг идэвхжүүлэх (биостимуляци). Бохирдсон газар нутагт тусгай бичил биетүүдийг устгах бодис нэвтрүүлэх (био нөхөн сэргээх) Био нөхөн сэргээх. Үе шатууд.

БОХИРДОЛ Химийн шинжилгээ Инженерийн технологи Биостимуляци (Байгалийн бичил биетний бүлгүүд) Биостимуляци (Хиймэл бичил биетний биологийн бүтээгдэхүүн) Биологийн нөхөн сэргээлт Биологийн нөхөн сэргээлтийн мониторинг Биофиторемедиаци (ургамал ба бичил биетний нэгдэл) Биофиторемедиаци

Шавжны хортон шавьжид тэсвэртэй трансген ургамал байгуулах 1. ӨВӨРИЙН ХОРЫН НИЙСЛЭЛ 2. ШАВЖНЫ АВГАЛЗ БОЛОН БУСАД хортон шавьж, эмгэг төрүүлэгчдийн эсийн хананд үйлчилдэг гидролитик ферментийн нийлэгжилт /ГИТ-3СП, 1,1,1,1,1,1,1,2,0,00,000,000:00:00/1. СИНТЕЗ УРГАМЛЫН ПОЛИСАХАРИДИЙГ ЭСЭРГҮҮЛЭГЧ ФЕРМЕНТИЙН УУРГЫН ДАРАН ОРУУЛАГЧДЫН ДАРАН ОРУУЛАГЧДЫН 4. УРГАМЛЫН ХОЁРДАГЧ БОЛОВСРОЛЫН ӨӨРЧЛӨЛТ: A) ШААРДЛАГАТАЙ БОДИС, СИНДИЙН ШИНЭ ЭСНИЙЛЭЛИЙН ХЯЗГААРЛАХ. ХАМГААЛАХ ХАРИУЦЛАГА: A) ӨЗГӨӨЛ генийн илэрхийлэл B) БАЙГАЛИЙН БОЛОН ХИЙМЭЛ ХҮЧИН ХҮЧИН ТӨРӨЛИЙН ГЕНИЙН ИЛЧЛЭЛИЙГ ЗОХИЦУУЛАХ Трансген ургамлын мөөгөнцөр үүсгэгчийг эсэргүүцэх чадвар нэмэгдэх Phomopsis helianhi Трансген ургамлын мөөгөнцрийн эмгэг үүсгэгчийг эсэргүүцэх чадвар Phomopsis helianhi A B A - трансген бус ургамал Б - трансген бус ургамал Б - трансген ургамал

Туршилтын тестэнд орсон сэдвүүдийн ойролцоо жагсаалт 1. Биотехнологийн түүх. Түүхэн үеүүдийн онцлог. Шинжлэх ухааны хөгжилд чухал үүрэг гүйцэтгэсэн хамгийн чухал нээлтүүд. 2. Биотехнологийн ерөнхий ойлголт: биотехнологийн систем, биотехнологийн процесс, биотехнологийн объект. 3. Биотехнологийн объект, тодорхойлолт, биотехнологийн систем дэх биологийн объектын байршлын шинж чанар, ангилал, практик хэрэглээний жишээ. 4. Биологийн объект болох бичил биетэн. Жишээ нь, биотехнологийн практик хэрэглээ. 5. Биологийн объект болох эс ба эдийн өсгөвөр. Жишээ нь, биотехнологийн практик хэрэглээ. 6. Биотехнологийн процесс. Үе шатууд. Биотехнологийн үйл явцын үе шатуудын товч тайлбар. 7. Сонголтын объект болох бичил биетний шинж чанар. Биотехнологийн бичил биетний сонголт. 8. Мутагенез: тодорхойлолт, мутагенезийн хэлбэр, мутаген хүчин зүйл. 9. Биотехнологийн процессын бэлтгэл үе шатанд сонгон шалгаруулалтын явцад бий болсон мутант бичил биетнийг сонгох. 10. Биологийн объектыг сонгох. Үе шат, арга барил, арга.

11. Генийн инженерчлэл: зорилго, технологи, биологийн объектууд, практик хэрэглээний жишээ, орчин үеийн ололт амжилт. 12. Генийн инженерийн ферментүүд. Катализаторын урвалын ангилал, шинж чанар. 13. Генийн инженерийн генийг олж авах арга. Аргын товч тайлбар, давуу болон сул талууд. 14. Генийн инженерчлэл дэх векторууд. Векторуудын тодорхойлолт, ангилал, шаардлага, товч шинж чанар. 15. Рекомбинант ДНХ. Генийн инженерчлэл дэх рекомбинант ДНХ-ийн тодорхойлолт, зорилго, арга. 16. Генийн инженерчлэлд рекомбинант ДНХ-ийг хүлээн авагч эсэд нэвтрүүлэх, өөрчлөгдсөн эсийг сонгох арга. 17. Ургамлын трансгенез. Вектор. Үндсэн стратегиуд. Трансгенийг нэвтрүүлэх, трансген организмыг сонгох арга. 18. Амьтны трансгенез. Вектор. Үндсэн стратегиуд. Трансгенийг нэвтрүүлэх, трансген организмыг сонгох арга. 19. Үүрэн инженерчлэл: зорилго, технологи, биологийн объектууд, практик хэрэглээний жишээ, орчин үеийн ололт амжилт. 20. Ургамлын эс, эдийг тариалах арга. Эсийн инженерчлэл дэх ургамлын өсгөвөрийн тариалалтын нөхцөл, ангилал, товч шинж чанарууд

21. Соматик ургамлын эрлийз. Үйлдвэрлэлийн техник, орчин үеийн ололт амжилт, практик хэрэглээний жишээ. 22. Протопласт: тодорхойлолт, эсийн инженерчлэлийн хэрэглээ, протопластыг тусгаарлах арга, нөхцөл. 23. Эсийн инженерчлэлд протопластыг тариалах, нэгтгэх. Арга, нөхцөл, фузоген. 24. Эс, ургамлын эдийн өсгөвөрийг практикт ашиглах. Биосинтез ба биотрансформаци, бичил үржүүлэх, үнэ цэнэтэй шинж чанартай трансген ургамлын жишээ. 25. Амьтны эсийн инженерчлэл. Арга, объект, технологи, орчин үеийн ололт амжилт, практик хэрэглээ. 26. Амьтны эсийн болон эдийн өсгөвөр. Тариалангийн ангилал, тариалалтын нөхцөл, орчин, соматик эрлийз олж авах арга, практик хэрэглээ. 27. Үүдэл эс. Онцлог шинж чанартай. Ангилал. Өргөдөл гаргах хэтийн төлөв. 28. Хувилах. Аргын онцлог. Ангилал. Өргөдөл гаргах хэтийн төлөв. 29. Биотехнологийн процесс. Тариалангийн үе шат. Үндсэн үе шатууд, бичил биетэн, ургамал, амьтны эсэд зориулсан орчны шинж чанар. Тоног төхөөрөмж. 30. Биотехнологийн процесс. Тариалангийн үе шат. Биологийн объектын тариалалтын горим. Биореактор дахь соёлын өсөлтийн үе шатууд, зорилтот бүтээгдэхүүний синтез.

31. Биотехнологийн процесс. Бүтээгдэхүүн хүлээн авах үе шат. Биотехнологийн бүтээгдэхүүнийг ялгах, цэвэршүүлэх үндсэн үе шат, арга. Биотехнологийн бүтээгдэхүүний жишээ. 32. Байгаль орчны биотехнологи: зорилго, арга, биологийн объект, практик хэрэглээний жишээ, орчин үеийн ололт амжилт. 33. Байгаль орчны биотехнологи. Ундны усны асуудал. Бохир ус цэвэрлэх аэробик аргууд. 34. Байгаль орчны биотехнологи. Ундны усны асуудал. Бохир ус цэвэрлэх анаэроб арга. 35. Байгаль орчны биотехнологи. Биологийн нөхөн сэргээлт, биофиторемедиаци. 36. Биотехнологи: зорилго, сэдэв, зорилт, биотехнологийн үндсэн чиглэл. Биотехнологийн салбарын орчин үеийн ололт амжилт. 37. Инженерийн энзимологи. Зорилго, асуудал. хэтийн төлөв. Ферментийн эх үүсвэрүүд. 38. Хөдөлгөөнгүй болсон ферментүүд. Давуу тал, хөдөлгөөнгүй болгох аргууд. 39. Хөдөлгөөнгүй болсон ферментүүд. Хөдөлгөөнгүй болгох тээвэрлэгч, практик хэрэглээ. 40. Уургийн инженерчлэл. Чиглэл, арга, хэтийн төлөв.

Генетикийн инженерчлэл нь функциональ идэвхтэй генетикийн бүтцийг (рекомбинант ДНХ) in vitro хэлбэрээр бүтээх, өөрөөр хэлбэл хиймэл генетикийн хөтөлбөрийг бий болгох явдал юм (Baev A.A.). E.S-ийн хэлснээр. Пирузян генийн инженерчлэл нь лабораторид (in vitro) хиймэл генетикийн бүтцийг рекомбинант буюу эрлийз ДНХ молекул гэж нэрлэгдэх хэлбэрээр бүтээх боломжийг олгодог туршилтын техникийн систем юм.

Генетикийн инженерчлэл гэдэг нь эсийн гаднах нуклейн хүчлийн молекулуудыг өөрчилснөөр генетикийн материалын шинэ хослолыг үйлдвэрлэх, үүссэн генийн бүтцийг амьд организмд шилжүүлэх, үүний үр дүнд энэ организм болон түүний үр удамд тэдгээрийг оруулах, үйл ажиллагааг нь хангах явдал юм. . Урьдчилан тодорхойлсон хөтөлбөрийн дагуу бие махбодоос гадуур молекулын генетикийн системийг бий болгох, дараа нь амьд организмд нэвтрүүлэх талаар бид ярьж байна. Энэ тохиолдолд рекомбинант ДНХ нь хүлээн авагч организмын генетикийн аппаратын салшгүй хэсэг болж, түүнд генетик, биохимийн, дараа нь физиологийн өвөрмөц шинж чанарыг өгдөг.

Хэрэглээний генийн инженерчлэлийн зорилго нь генетикийн аппаратад нэвтрүүлснээр хүний ​​биед ашигтай шинж чанарыг өгөх ийм рекомбинант ДНХ молекулуудыг зохион бүтээх явдал юм. Жишээлбэл, "биологийн реактор" - хүний ​​хувьд фармакологийн ач холбогдолтой бодис үйлдвэрлэдэг бичил биетэн, ургамал, амьтдыг үйлдвэрлэх, хүний ​​хувьд үнэ цэнэтэй тодорхой шинж чанартай ургамлын сорт, амьтны үүлдэр бий болгох. Генетикийн инженерийн аргууд нь генетикийн баталгаажуулалт хийх, удамшлын өвчнийг оношлох, ДНХ-ийн вакцин бий болгох, янз бүрийн өвчний генийн эмчилгээ хийх боломжийг олгодог.

Рекомбинант ДНХ технологи нь дараах аргуудыг ашигладаг.

Хязгаарлалтын нуклеазаар ДНХ-ийн өвөрмөц задрал, бие даасан генийг тусгаарлах, зохицуулах үйл явцыг хурдасгах;

Цэвэршүүлсэн ДНХ-ийн фрагмент дэх бүх нуклеотидын хурдан дараалал нь генийн хил хязгаар, түүгээр кодлогдсон амин хүчлийн дарааллыг тодорхойлох боломжийг олгодог;

Рекомбинант ДНХ-ийн бүтээн байгуулалт;

Нэмэлт нуклейн хүчлийн дарааллыг холбох чадварт үндэслэн тодорхой РНХ эсвэл ДНХ-ийн дарааллыг илүү нарийвчлалтай, мэдрэмжтэй илрүүлэх боломжийг олгодог нуклейн хүчлийн эрлийзжилт;

ДНХ-ийн клончлол: полимеразын гинжин урвал ашиглан in vitro өсгөвөрлөх эсвэл ДНХ-ийн фрагментийг бактерийн эсэд оруулах, ийм хувиргасны дараа энэ фрагментийг сая сая хуулбараар хуулбарлах;

Рекомбинант ДНХ-ийг эс эсвэл организмд нэвтрүүлэх.

Рекомбинант молекулуудыг бүтээх ажлыг хэд хэдэн фермент, ялангуяа хязгаарлалтын фермент ашиглан гүйцэтгэдэг. Одоогоор 400 гаруй төрлийн хязгаарлалтын ферментийг ашиглаж байна. Эдгээр ферментүүдийг олон төрлийн бичил биетүүд нийлэгжүүлдэг.

Хязгаарлалтын ферментүүд нь хоёр хэлхээтэй ДНХ молекул дахь тодорхой нуклеотидын дарааллыг таньж, тасалдаг. Гэсэн хэдий ч наалдамхай үзүүрийг бүрдүүлдэг дөрвөн суурийн хоорондох устөрөгчийн холбоо нь хоёр ДНХ-ийн хэлтэрхийг барихад хангалттай хүчтэй биш тул молекулын клончлоход хязгаарлах ферментүүд хангалтгүй.

Рекомбинант ДНХ молекулын нэг хэсэг нь хувилах ёстой генийг агуулдаг бол нөгөө хэсэг нь эс дэх рекомбинант ДНХ-ийг хуулбарлахад шаардлагатай мэдээллийг агуулдаг.

Байгалийн шалгарал бол хувьслын хөдөлгөгч хүч юм
Байгалийн шалгарал нь илүү зохицсон организмыг давуу эрхтэйгээр амьд үлдэх, тохиромжгүй организмуудыг устгахад чиглэсэн үйл явц юм. Илүү дасан зохицсон хүмүүс үр удмаа үлдээх боломжтой байдаг. Кейс сонгох материал...

Пектиний бодисыг исгэх үүсгэгч бодисыг тодорхойлох
Туршилтыг тохируулах. 6-7 см өндөртэй маалингын сүрлийг хоёр газар утсаар боож, стандарт хэмжээнээс том хэмжээтэй туршилтын хоолойд хийж, 2/3-ыг цоргоны усаар дүүргэнэ. Туршилтын хоолойг хясаагаар хавчуулж, шатаагч дээр буцалгана ...

Биосферээс ноосфер руу шилжих шилжилт
Хүн төрөлхтний оюун ухаан, хөдөлмөрийг гаригийн хэмжээнд геологийн хүчин болгон хувиргах нь түүний салшгүй хэсэг болох биосферийн хүрээнд явагдсан. БА. Вернадский судалгаандаа асар их нөлөөллийг байнга онцолж байв ...